Izopropyl β-D-1-tiogalaktopyranozid
| Izopropyl β-D-1-tiogalaktopyranozid | |
 | |
| Všeobecné vlastnosti | |
| Sumárny vzorec | C9H18O5S |
| Synonymá | IPTG, propán-2-yl 1-tio-β-D-galaktopyranozid |
| Fyzikálne vlastnosti | |
| Molárna hmotnosť | 238,30 g/mol |
| Ďalšie informácie | |
| Číslo CAS | 367-93-1 |
| Pokiaľ je to možné a bežné, používame jednotky sústavy SI. Ak nie je hore uvedené inak, údaje sú za normálnych podmienok. | |
Izopropyl β-D-1-tiogalaktopyranozid (IPTG) je reagent využívaný v molekulárnej biológii. Svojou štruktúrou pripomína alolaktózu, čo je laktózový metabolit spúšťajúci transkripciu lac operónu. Preto sa využíva na indukciu expresie proteínov, ktoré sú pod riadením lac operátoru.
Mechanizmus pôsobenia
[upraviť | upraviť zdroj]Podobne ako alolaktóza, IPTG sa viaže na lac represor a alostericky uvoľňuje tetramérny represor z lac operátoru, čím umožňuje transkripciu génov v lac operóne, ako je gén kódujúci beta-galaktozidázu, hydrolyzačný enzým katalyzujúci hydrolýzu β-galaktozidov na monosacharidy. Narozdiel od alolaktózy však atóm síry v IPTG tvorí väzbu, ktorú bunka nevie hydrolyzovať, takže sa tento induktor nemetabolizuje. Jeho koncentrácia je teda počas experimentu konštantná.
Príjem IPTG bunkami E. coli môže byť nezávislý na pôsobení laktózapermeázy, keďže zahŕňa i iné dráhy.[1] V nízkych koncentráciách vstupuje IPTG do bunky vďaka laktózapermeáze, ale pri vyšších koncentráciách (typických pre indukciu proteínov) môže IPTG vstúpiť do bunky nezávisle na laktózapermeáze.[2]
Využitie v laboratóriu
[upraviť | upraviť zdroj]Ak sa IPTG skladuje ako prášok pri teplote 4 °C alebo nižšej, je stabilný po dobu 5 rokov. V roztoku je omnoho menej stabilný - Sigma-Aldrich neodporúča skladovanie dlhšie ako mesiac pri izbovej teplote.[3] IPTG je efektívnym induktorom proteínovej expresie pri koncentráciách 100 μM až 3,0 mM.[chýba zdroj] Typicky sa pridáva sterilný filtrovaný roztok IPTG s koncentráciou 1 M v pomere 1:1000 k exponenciálne rastúcej bakteriálnej kultúre, čím sa dosiahne koncentrácia 1 mM. Použitá koncentrácia závisí na požadovanej sile indukcie a rovnako na genotype použitých buniek či plazmidov. Ak je prítomný lacIq mutant, ktorý produkuje nadmerné množstvo lac represoru, môže byť nutné použiť vyššie koncentrácie IPTG.[4]
IPTG sa používa v modrobielom teste spolu s farbivom X-gal. Tento test umožňuje identifikáciu transformovaných kolónií s rekombinantným plazmidom počas klonovacích experimentov oproti kolóniám, ktoré rekombinantný plazmid nemajú.[chýba zdroj]
Referencie
[upraviť | upraviť zdroj]- ↑ The effect of the lacY gene on the induction of IPTG inducible promoters, studied in Escherichia coli and Pseudomonas fluorescens. Curr. Microbiol., June 1998, s. 341–7. Dostupné online. DOI: 10.1007/s002849900320. PMID 9608745.
- ↑ lac operon induction in Escherichia coli: Systematic comparison of IPTG and TMG induction and influence of the transacetylase LacA. Journal of Biotechnology, 2012, s. 82–8. DOI: 10.1016/j.jbiotec.2011.10.009. PMID 22079752.
- ↑ https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma-Aldrich/Product_Information_Sheet/i5502pis.pdf
- ↑ BL21(DE3) Competent Cells, BL21 (DE3)pLysS Competent Cells, and BL21 Competent Cells Instruction Manual. Revision #066004e. vyd. La Jolla, CA : Stratagene, 2006. S. 7.
Zdroj
[upraviť | upraviť zdroj]Tento článok je čiastočný alebo úplný preklad článku Isopropyl_β-D-1-thiogalactopyranoside na anglickej Wikipédii.